3. 比浊测定法
在酶促反应进程的零级反应期内每隔一定时间(2-30s)进行一次监测,连续监测多次,求出单位时间内的反应速度。
2.2 多点速率法
观察在零级反应期内两个时间点的吸光度,用两个点的吸光度的差值(ΔA)除以时间(分),计算出每分钟的吸光度变化值。
2.1 两点速率法
其原理是在酶促反应的最适前提下,用物理、化学或酶促反应的分析方法,在反应速度恒按期(零级反应期)来连续观察和记实一定反应时间内底物或产物量的变化,以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度。其详细方法有两点速率法和多点速率法。
2. 连续监测法
也称固定时间法。在单试剂分析中,该法可以消除样品以及试剂的颜色、浊度的干扰,其原理是在样品与试剂混合后的延滞期后读取一个点A1,一定时间后读取A2,ΔA=A2-A1,然后比较尺度和测定的ΔA值,求得待测物的浓度。单试剂分析常见的有肌酐苦味酸法。在双试剂分析中,该法还具有消除内源性物质测定的干扰,其原理是加入试剂1后读取A1,加入试剂2后读取A2,A1相称于读出样品空缺值,A2才是实际呈色反应,因此ΔA=A2-A1。
1.1 两点终点法
以试剂和样品混合之前的空气空缺(GB)、水空缺(WB)或试剂空缺(RB)的吸光度值为测定计算基点,以反应终点的吸光度读数减去空缺读数,得到反应吸光度。通过与相同前提下校准液反应吸光度的比较,求得测定结果。常与一点校准法配合使用,即采用一个校准浓度,校准曲线通过零点且成线性。也应用多点校准。
1.1一点法
根据反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其吸光度大小,对物质进行定量分析的方法。在测定计算方式上,一般分为一点法和两点法两种。
1.终点法